Formamidopyrimidine-DNA -N- glycosylase (Fpg) is an important enzyme involved in repair of oxidized DNA bases of Escherichia coli. Previously it was shown that the C-terminal domain of Fpg harbors DNA-binding elements. Therefore, it was proposed that C-terminal domain of Fpg plays the principal DNA-binding role. Also, it is known that actinobacteria (Mycobacterium tuberculosis, etc.) possess proteins with unknown functions homologous to the C-terminal but not N-terminal Fpg domain. We had developed a method to express and purify C-terminal Fpg domain and studied its activities. C-Fpg was rather efficient in binding damaged DNA. Despite the absence of the catalytic domain, C-Fpg possessed a low residual ability to cleave apurine/apyrimidine substrates. The DNA substrate was cleaved by -elimination. In the presence of Mg 2+ ions C-Fpg showed DNase activity not observed in the original Fpg protein. Thus C-Fpg homologues from actinobacteria also can be Mg 2+ -dependent endonucleases involved in DNA repair or DNA metabolism.
Формамидопиримидин-ДНК-N-гликозилаза (Fpg) – один из важнейших ферментов, вовлеченный в репарацию окисленных оснований ДНК Escherichia coli . Ранее показано, что в C-концевом домене расположены ДНК-связывающие элементы. Предполагается, что C-концевой домен фермента Fpg играет основную ДНК-связывающую роль. Кроме того известно, что у ряда актинобактерий ( Mycobacterium tuberculosis и др.) существуют белки с неизвестными функциями, гомологичные исключительно C-концевому домену Fpg. Нами разработана эффективная методика выделения С-домена белка Fpg (C-Fpg) и исследованы его активности. Белок C-Fpg достаточно эффективно связывал поврежденные ДНК-лиганды и, несмотря на отсутствие каталитического домена, обладал остаточной способностью расщеплять субстраты, содержащие апурин-апиримидиновый сайт. Расщепление субстрата происходило по механизму -элиминирования. В присутствии ионов Mg 2+ белок C-Fpg приобретал гидролитическую ДНКазную активность, не характерную для исходного белка Fpg. Таким образом, гомологи C-Fpg из актинобактерий также могут быть Mg 2+ -зависимыми эндонуклеазами, вовлеченными в репарацию или другие процессы метаболизма ДНК.
